干細胞的培養(yǎng)需要胎牛血清提供營養(yǎng)成分。Ausbian進口胎牛血清，澳洲血源內毒素含量低，品質穩(wěn)定。

哺乳動物囊胚內細胞群(inner cell mass, ICM)的瞬時多能狀態(tài)，可以在體外，通過建立胚胎干細胞(embryonic stem cells, ESCs)或體細胞重編程為誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)來獲得。

通過這些方法可以產生可擴展的PSC系，根據(jù)培養(yǎng)條件的不同，來模擬不同的早期胚胎階段。植入前的icm樣PSCs通常被稱為“naive"，而植入后的上皮細胞樣PSCs被稱為“primed"。 naive多能性的黃金標準是產生，具有同源psc來源細胞的高貢獻的活嵌合動物，這種方法已經在小鼠和大鼠中得到了很好的建立。

從原始psc中產生高貢獻的嵌合非人靈長類動物(NHPs)，將有力地證實在進化上與人類接近的物種中植入前的icm樣多能性。

無論是通過早期胚胎注射CRISPR-Cas9試劑，還是通過培養(yǎng)成纖維細胞基因編輯結合體細胞核移植，對nhps進行復雜的基因修飾，其效率都受到限制。另一種方法是利用同源psc產生高貢獻嵌合。然而，NHPs和其他哺乳動物的嵌合現(xiàn)象落后于嚙齒動物。先前的研究表明，NHP與同源PSCs嵌合產生的流產胎兒或食蟹猴后代的嵌合組織供體細胞貢獻較低(0.1-4.5%)。

通常認為，不能實現(xiàn)大量嵌合是由于供體細胞與宿主胚胎缺乏發(fā)育匹配，供體細胞在囊胚或組織壁龕中逐漸競爭性消除所致。

最近的研究表明，通過過度表達外源因子(如BCL2或BMI1)來操縱生存途徑部分克服PSC凋亡并增強種間嵌合，具有誘導基因組異常的風險。因此，改進培養(yǎng)程序以達到更忠實的primed多能狀態(tài)是一種合適的實驗方法。目前有多種培養(yǎng)基可用于誘導人類naive多能干細胞，這些培養(yǎng)基在naive多能基因的表達水平和基因組穩(wěn)定性方面存在差異目前已知，誘導primed多能基因高表達的配方顯示出較低的全球dna甲基化水平，從而導致基因組不穩(wěn)定和核型異常這種異常可能影響注射的psc的分化潛能。值得注意的是，最近報道的4CL培養(yǎng)基能夠產生具有高表達水平的primed多能基因的人類原始psc，并且在長時間培養(yǎng)中沒有可檢測到的核型異常

近日，發(fā)表在《Cell》上的一篇研究，系統(tǒng)測試了多種人PSC培養(yǎng)基對食蟹猴ESCs的影響，并優(yōu)化了早期猴胚胎的注射方案和注射胚胎的體外培養(yǎng)。

文章標題為：“Live birth of chimeric monkey with high contribution from embryonic stem cells"。

科研人員發(fā)現(xiàn)，4CL可使猴供體PSCs在同源囊胚內的存活改善猴初始多能狀態(tài)，并且建立了一個完整的組織表征管道，包括GFP+細胞計數(shù)，線粒體和基因組DNA的單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析，以及單細胞轉錄組分析。使用這些方法，研究人員證明了猴ESCs在體外長時間胚胎培養(yǎng)和體內妊娠期間的高度嵌合，產生的后代在嵌合組織(包括性腺和胎盤)中顯示了20-90%的供體ESCs。該結果代表了一個原則性的證明，即通過與同源的原始PSCs的早期胚胎互補，可以在NHPs中產生具有高ESC貢獻的嵌合體，為未來一代基因編輯的PSCs的轉基因NHPs鋪平了道路。